一、菌种传代的基本概念

‌菌种传代是指将微生物从一代培养物转移到新鲜培养基中的过程‌，每一次的转接培养都是一次传代过程‌。

菌种分为以下几类：

‌标准菌株‌：直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株，通常默认为第0代菌株

‌标准储备菌株‌：将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株，通常为第1代或第2代菌株

‌储备菌株‌：从标准储备菌株转接一代获得的培养物，通常为第2代或第3代菌株

‌工作菌株‌：由标准储备菌株、储备菌株或标准物质转接一代获得的菌株，通常为第3-5代菌‌

‌重要原则‌：菌株传代只能由上往下传，储备菌株可以作为工作菌株使用，但工作菌株不能作为储备菌株使用。实验室使用的工作菌株一般不可超过第5代‌。

二、菌种保存的基本原理

‌菌种保存的核心目标是使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态‌，也就是使微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内‌。主要措施包括：

干燥

低温

隔绝空气

缺乏营养‌

三、常用菌种保存方法

1.斜面保存法

‌操作方法‌：

将营养琼脂加热煮沸溶解后分装至试管中，灭菌后摆长斜面凝固

挑取菌落"之"字形划线接种至培养基斜面

置于合适条件下培养

培养结束后，置2-8℃冷藏保存（部分菌株如铜绿假单胞菌、副溶血性弧菌等可置室温保存）‌

‌特点‌：

操作简单，使用方便

但易变异，屡次传代会影响微生物的性状

污染杂菌的机会较多‌

‌保存周期‌：

霉菌、酵母菌、放线菌和芽孢菌：2-4个月传代一次

细菌：一般保存一个月传代一次‌

2.液体石蜡覆盖保存法

‌操作方法‌：

将菌种接种至斜面或穿刺接种至半固体培养基管

培养结束后，在培养基表面覆盖一层无菌液体石蜡

2-8℃冷藏保存‌

‌优点‌：

1）防止培养基水分蒸发

2）阻止氧气进入，减弱代谢作用

3）比斜面保存法的保存时间更长‌

3.甘油保菌法

‌操作方法‌：

将甘油和生理盐水按1:1比例配成终浓度为50%的甘油溶液

按50%甘油:菌液=1:1比例混合，使甘油终浓度在20-30%

转移至-60~-80℃冰箱长期冻存‌

‌特点‌：

1）适用于菌种的中长期保藏

2）操作简单、保藏期长

3）菌种不容易发生变异

4）保藏时间可在1年以上‌

4.冷冻干燥保藏法

‌操作方法‌：

使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻，在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)‌

5.其他方法

1）载体保藏法（如沙土保藏法、滤纸保藏法）‌

2）寄主保藏法（用于不能在人工培养基上生长的微生物）‌

3）冷冻保藏法（低温冰箱、干冰酒精快速冻结、液氮等）‌

四、菌种保藏的一般步骤

1）挑选特征典型的纯菌菌落

2）确定保藏的合适菌体形态

3）选择最适宜的保藏方法

4）定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化‌

五、注意事项

1）保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物‌，至少应是第三代的培养物‌

2）必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉‌

3）若在传代过程中出现明显变异，不可继续使用‌

4）不要对菌种进行反复冻融，避免死亡‌

‌5）选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期保持菌种原有特性，同时也应兼顾方法的经济性和简便性