一、样品处理阶段

无菌操作：采样工具、容器需灭菌，避免环境微生物污染；均质过程在生物安全柜中进行，防止气溶胶扩散。

样品保存：若不能立即检测，需冷藏（4℃）或冷冻（-18℃）保存，但不超过24小时（冷冻可能影响菌活性）。

二、培养与分离阶段

1、培养基质量控制

Baird-Parker琼脂：使用前验证其选择性（如亚碲酸钾有效性）和促生长能力。

血琼脂平板：确保羊血未溶血，避免假阴性。

2、典型菌落识别

注意与凝固酶阴性葡萄球菌（如S. epidermidis）区分，避免误判（需结合凝固酶试验）。

某些酵母或霉菌可能在Baird-Parker平板上形成类似菌落，需镜检排除。

三、确证试验关键点

1、凝固酶试验

玻片法：可能出现假阳性（如菌体自凝），需用试管法复核。

试管法：使用EDTA抗凝兔血浆，观察4小时内凝固（部分菌株延迟凝固）。

2、革兰染色

陈旧培养物可能染色不典型（如部分革兰阳性菌转阴），需用新鲜培养物。

四、快速检测方法注意事项

显色培养基：不同品牌显色特性可能差异，需做阳性对照验证。

PCR检测：防止DNA污染（设阴性对照），提取时加入内参排除抑制剂干扰。

五、生物安全与质控

1、生物安全防护

金黄色葡萄球菌为BSL-2级病原体，实验人员需穿戴防护服、手套和口罩。

废弃物需高压灭菌（121℃, 30分钟）后再处理。

2、质控要求

每批次实验同步接种标准菌株作为阳性对照。

空白对照（无菌生理盐水）排除培养基污染。

六、特殊食品样本处理

高盐/高糖食品（如腌制品、蜜饯）：需延长增菌时间（48小时）或增加稀释倍数，降低渗透压影响。

加工食品（如熟肉、乳粉）：可能含受损菌体，建议使用非选择性预增菌（如TSB）恢复损伤细胞。

七、结果判读与报告

定量计数：选择30-300 CFU的平板计数，避免菌落过密导致误差。

阴性结果确认：若增菌液浑浊但平板无典型菌落，需转种血琼脂排除杂菌抑制。

八、常见错误规避

错误1：忽略凝固酶试验的假阳性（如使用人血浆可能含天然抗体）。

解决：严格选用兔血浆，设阳性/阴性对照。

错误2：过度依赖单一鉴定方法（如仅用显色培养基）。

解决：结合生化试验（如耐热核酸酶）或分子鉴定。